雙抗夾心法CLIA檢測原理
查看詳情雙抗夾心化學發(fā)光法（CLIA）是將雙抗體夾心法與化學發(fā)光檢測技術結合在一起的檢測方法。它的一般實驗步驟包括：將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板中，制成固相載體；向微孔中分別加入標準品或標本，使待測抗原與連接于固相載體上的抗體結合；此后加入生物素化的針對待測抗原的抗體，形成夾心；再將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入 HRP 標記的親和素，再次徹底洗滌后加入魯米諾發(fā)光底物，并用光子計數(shù)器，讀出各孔的相對光度值（RLU）。此法與雙抗夾心ELISA法的區(qū)別在于采用了增強型的ECL發(fā)光體系作為發(fā)光底物試劑來實......
免疫組織化學樣本處理I
查看詳情免疫組織化學用于觀察標本的染色結果對靶抗原抗體進行鑒定和定位，其標本制備非常重要。在制作標本過程中，需保持抗原的完整性，在染色、洗滌包埋等過程中避免發(fā)生溶解和變性，同時防止擴散至鄰近細胞或組織間隙中。圖1. IHC結果示意圖組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學結果的前提，活體組織，各種體液及穿刺液和細胞都可以用于免疫組化分析，針對不同的標本類型可以選擇不同的制備方法。活體組織常選用石蠟切片和冰凍切片處理，而體液、穿刺液及細胞樣本則選用涂片方式處理。對于細菌菌落或尸體病變組織，可將新鮮切面壓印于玻......
單克隆抗體的詳細制備方法
查看詳情自Kohler和Milstein建立了淋巴細胞雜交瘤技術后，他們將只針對一種抗原決定簇產(chǎn)生抗體B淋巴細胞和能無限增殖的腫瘤細胞融合雜交，產(chǎn)生既能分泌抗體，又能無限增殖的雜交融合細胞，它所產(chǎn)生的抗體是針對同一抗原決定簇的高度同質的抗體，即單克隆抗體（monoclonal antibody），簡稱單抗。與多抗相比，單抗純度高，專一性強、重復性好、且能持續(xù)地無限量供應。單抗技術的問世，不僅帶來了免疫學領域里的一次革命，而且它在生物醫(yī)學科學的各個領域獲得極廣泛的應用，促進了眾多學科的發(fā)展。單克隆抗體制備的基本過程如下：（1）用抗原......
降鈣素原，常規(guī)感染檢查的侯選者?
查看詳情隨著抗生素在臨床中使用地越來越廣泛，加上新的病毒如SARS，H7N9等的發(fā)現(xiàn)，新的問題也隨之而來。由于部分患者臨床病情隱匿或不典型，并且受到醫(yī)生個體臨床思維及經(jīng)驗局限的影響，癥狀相似疾病的確診往往也變得困難起來。特別是對于細菌性感染和非細菌性感染，其治療手段完全不同，一旦出現(xiàn)誤診，有可能會造成錯過最佳診療時間，導致病情惡化等嚴重后果。因此，我們在臨床上應該如何判斷患者到底是細菌性感染還是非細菌性感染呢？實驗人員在研究中發(fā)現(xiàn)，PCT（降鈣素原，procalcitonin）是一種非常特殊的蛋白質，其結構如圖1所示當嚴......
實驗操作指南-免疫組織化學常見問題和解決方法
查看詳情免疫組織化學技術又稱免疫細胞化學技術，是指用標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性和分子生物技術的敏感性等巧妙結合，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質（如蛋白質、多肽、酶、激素、病原體以及受體等），是單一的靜止的形態(tài)學描述，上升到結構、功能和代謝為一體的動態(tài)觀察，為疾病的診斷、鑒別診斷和發(fā)病機制的研究提供了強有力的手段。然而，要想得到一張高質......
多克隆抗體的詳細制備方法
查看詳情多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）是指用含有多個抗原決定簇的抗原免疫動物后刺激機體多個B細胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的不同抗體，得到的免疫血清含有多種抗體。多克隆抗體可應用于WB、IHC、Elisa、IP等實驗中，是生物醫(yī)學研究領域不可或缺的研究伙伴。下面我們會來介紹一下多克隆抗體的制備過程。1.免疫原的制備普通的大分子蛋白，通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原......
競爭抑制ELISA檢測原理
查看詳情競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附于固相載體，隨后加入待測抗原（標準品和樣本）和一定量的生物素標記的抗原（檢測液A），使二者競爭與固 相抗體結合，溫育后經(jīng)洗滌去掉未結合物，然后加入HRP標記的親和素，經(jīng)過溫育和徹底洗滌后加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。待測標本濃度越高，標記抗原和抗體的結合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關，而與樣品中待測物質含量呈負相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。由于生物大分......
大腸桿菌重組蛋白純化方法
查看詳情分子克隆構建載體的最終目的是能夠將目的蛋白表達出來，常見的表達系 統(tǒng)有大腸桿菌表達系統(tǒng)，酵母表達系統(tǒng)，昆蟲細胞表達系統(tǒng)，植物表達系統(tǒng)以 及哺乳動物細胞表達系統(tǒng)。大腸桿菌表達系統(tǒng)具有遺傳背景清楚、操作簡單、 產(chǎn)量高、價格低等優(yōu)點，是最常用的蛋白表達系統(tǒng)之一。重組蛋白的分離純化 是蛋白，抗體，Elisa 試劑盒研發(fā)與制備的基礎。常見的純化方法有離子交換層 析，親和層析，疏水作用層析，排阻層析，電泳等，但純化工作不僅要保證純 度，重復性，還要保證穩(wěn)定性并控制成本。以下將以 E.coli 表達的重組蛋白為例， 給大家......