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做通路研究?TGF-β1活性蛋白安排上!

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族中一個(gè)多功能的細(xì)胞因子,在哺乳動(dòng)物組織中廣泛表達(dá),對(duì)維持組織穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。它最初以潛伏復(fù)合物的形式分泌,需經(jīng)蛋白酶或整合素等激活后才能與細(xì)胞表面的TGF-β受體結(jié)合,進(jìn)而啟動(dòng)下游的SMAD信號(hào)通路(經(jīng)典通路)或非SMAD通路(如MAPK、PI3K通路)。TGF-β1的功能具有顯著的上下文依賴性:在正常上皮細(xì)胞和早期癌變階段,它主要發(fā)揮腫瘤抑制作用,通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子(如p15和p21)來強(qiáng)制阻滯細(xì)胞周期于G1期,從而抑制細(xì)胞增殖。然而,在腫瘤進(jìn)展的晚期,癌細(xì)胞常克服其生長抑制效應(yīng),此時(shí)TGF-β1轉(zhuǎn)而促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展,它通過誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲與遷移能力,并刺激血管生成、抑制免疫監(jiān)視,為腫瘤轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。此外,TGF-β1在傷口愈合、免疫調(diào)節(jié)(特別是誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活性)以及纖維化疾?。ㄈ绺?、肺、腎纖維化)中扮演核心角色,其信號(hào)通路的失調(diào)與自身免疫病、癌癥和纖維化等多種病理過程密切相關(guān)。

○ 產(chǎn)品貨號(hào):APA124Hu01

○ 結(jié)合活性驗(yàn)證
研究表明TGF-β1可與TGF-β受體1、核心蛋白聚糖(Decorin)、潛伏轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白1(LTBP1)等分子相互作用。為此,我們通過ELISA結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了重組人TGF-β1與重組人LTBP1的結(jié)合能力。簡要步驟如下:將TGF-β1用含0.01%BSA(pH 7.4)的PBS緩沖液進(jìn)行梯度稀釋,取100μL稀釋樣品加入LTBP1包被的微孔板中,每個(gè)濃度設(shè)雙復(fù)孔,37℃孵育2小時(shí)。棄液后使用PBST洗滌,加入抗LTBP1多克隆抗體37℃孵育1小時(shí),再次棄液并洗滌3次。加入HRP標(biāo)記的二抗孵育后,經(jīng)3次洗滌,加入底物溶液37℃顯色15-25分鐘。最終每孔加入50μL終止液,立即于450nm波長下檢測(cè)吸光度。如圖1所示,TGF-β1與LTBP1的結(jié)合活性呈現(xiàn)劑量依賴性效應(yīng)。
○ 結(jié)果展示
Figure 1. The binding activity of TGF-β1 with LTBP1.