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骨再生研究好搭子——BMP2活性蛋白

骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)作為TGF-β超家族中的重要成員,在骨骼發(fā)育與軟骨形成過程中發(fā)揮著核心調(diào)控作用。該蛋白通過參與Hedgehog信號(hào)通路、TGF-β信號(hào)通路及細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用,廣泛調(diào)控多種生理過程,包括心肌細(xì)胞分化和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。其最顯著的功能是能夠高效誘導(dǎo)未分化的間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞定向分化,啟動(dòng)被稱為“成骨作用”的新骨形成過程。在分子機(jī)制上,BMP2通過結(jié)合細(xì)胞表面特異性受體,激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng),從而啟動(dòng)骨再生程序?;谶@一獨(dú)特的成骨能力,重組人BMP2已成為重要的骨修復(fù)生物制劑,在脊柱融合、復(fù)雜骨折治療及大型骨缺損修復(fù)等臨床應(yīng)用中,通過植入局部引導(dǎo)機(jī)體自身細(xì)胞完成新骨生成。


○ 產(chǎn)品貨號(hào):APA013Hu02

○ 刺激活性驗(yàn)證

為探究骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,將HepG2細(xì)胞以4000個(gè)/孔的密度接種于96孔板的復(fù)孔中,靜置貼壁過夜;隨后更換培養(yǎng)基,加入以含5%血清的標(biāo)準(zhǔn)DMEM培養(yǎng)基稀釋的不同濃度重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(rhBMP2)。培養(yǎng)72小時(shí)后,通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),并采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。具體操作如下:向96孔板各孔加入10μL CCK-8試劑,將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)1~4小時(shí)后,利用酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm波長(zhǎng)處的吸光度值。重組人BMP2作用HepG2細(xì)胞72小時(shí)后,經(jīng)倒置顯微鏡觀察到的細(xì)胞凋亡情況見圖1;經(jīng)CCK-8試劑盒檢測(cè)的細(xì)胞活力結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示,BMP2可顯著降低HepG2細(xì)胞的活力,且該重組人BMP2的半數(shù)有效劑量(ED50)為3.25μL/mL。

○ 結(jié)果展示

Figure 1. Inhibition of HepG2 cells proliferation after stimulated with recombinant human BMP2.

(A) HepG2 cells cultured in DMEM, stimulated with 5μg/mL BMP2 for 72h; 

(B) Unstimulated HepG2 cells cultured in DMEM for 72h.

Figure 2. Inhibition of HepG2 cells proliferation after stimulated with recombinant human BMP2.

○ 結(jié)合活性驗(yàn)證

研究發(fā)現(xiàn)卵泡抑素樣蛋白1(FSTL1)是BMP2的相互作用蛋白。為檢測(cè)重組人BMP2與重組人FSTL1的結(jié)合活性,我們采用ELISA結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法:首先將BMP2在含0.01% BSA(pH 7.4)的PBS緩沖液中進(jìn)行梯度稀釋,取100μL平行樣品加入FSTL1包被的微孔板中,37℃孵育2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體后用PBST洗滌,加入抗BMP2多克隆抗體37℃孵育1小時(shí),再次棄液并洗滌3次。隨后加入HRP標(biāo)記的二抗孵育,棄液后洗滌3次。加入底物溶液37℃孵育15-25分鐘,最后加入50μL終止液,立即在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。如圖3所示,BMP2與FSTL1的結(jié)合活性呈現(xiàn)劑量依賴性效應(yīng)。

○ 結(jié)果展示

Figure 3. The binding activity of BMP2 with FSTL1.