雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板 中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中待測抗原與連接于 固相載體上的抗體結合，然后加入生物素化的針對待測抗原的抗體，形成夾心， 將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入 HRP 標記的親和素，再次徹底洗滌后加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測抗原呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(O.D.值)，用于樣本中待測抗原濃度測算。

原理圖如下：